Studi mengevaluasi vaksinasi COVID-19 dengan defisiensi protein aksesori rekombinan SARS-CoV-2

Studi mengevaluasi vaksinasi COVID-19 dengan defisiensi protein aksesori rekombinan SARS-CoV-2

Studi mengevaluasi vaksinasi COVID-19 dengan defisiensi protein aksesori rekombinan SARS-CoV-2. Studi terbaru yang diposting ke server pracetak bioRxiv* menilai dampak dari rekombinan aksesori protein-kekurangan parah sindrom pernafasan akut coronavirus 2 (rSARS-CoV-2) imunisasi terhadap sindrom pernafasan akut yang parah coronavirus 2 (SARS-CoV-2) transmisi dan keparahan penyakit .

 

Studi mengevaluasi vaksinasi COVID-19 dengan defisiensi protein aksesori rekombinan SARS-CoV-2
Studi mengevaluasi vaksinasi COVID-19 dengan defisiensi protein aksesori rekombinan SARS-CoV-2

Studi: Imunisasi dengan defisiensi protein aksesori rekombinan SARS-CoV-2 melindungi terhadap tantangan mematikan dan penularan virus. Kredit Gambar: Seamm/Shutterstock Laporan yang muncul mencatat kemanjuran vaksin penyakit coronavirus 2019 (COVID-19) yang semakin berkurang. Berbagai penelitian telah melaporkan potensi vaksin hidup yang dilemahkan (live-attenuated vaksins/LAVs) dalam memberikan perlindungan yang kuat terhadap beragam varian SARS-CoV-2 yang menjadi perhatian (VOCs).

Tentang penelitian

Penelitian ini menyelidiki potensi, keamanan, dan stabilitas rSARS-CoV-2 yang kekurangan ORF ganda sebagai LAV untuk profilaksis infeksi SARS-CoV-2 dan penyakit terkait.

Sel epitel ginjal dari monyet hijau Afrika dikumpulkan dari American type culture collection (ATCC) bersama dengan sel Vero E6 yang mengekspresikan human angiotensin-converting enzyme 2 (hACE2) dan transmembran serine protease 2 (TMPRSS2). Protein spike (S), nukleokapsid (N), envelope (E), dan membran (M) SARS-CoV-2 juga diperoleh. Tim juga mengumpulkan VOC SARS-CoV-2 USA-WA1/2020, alfa, beta, dan delta, sedangkan rSARS-CoV-2 wildtype (WT) dan rSARS-CoV-2 dihasilkan.

Protein kerangka baca terbuka (ORF) aksesori dihapus ganda dengan reaksi berantai polimerase terbalik (PCR) dalam fragmen virus 1, yang kemudian dipasang kembali menggunakan endonuklease restriksi. Ini diikuti oleh infeksi sel Vero E6 dengan rSARS-CoV-2 WT dan penghapusan ORF3a/ORF7a, ORF3a/ORF6, dan ORF3a/ORF7b. Sel-sel kemudian diimunisasi dan uji plak dilakukan.

Total asam ribonukleat (RNA) dari kontrol atau sel Vero yang terinfeksi virus diekstraksi. Amplifikasi gen virus N, ORF3a, ORF6, ORF7a, ORF7b, dan ORF8 kemudian dilakukan dengan reverse transcription-PCR (RT-PCR). Enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay digunakan untuk menghitung sel T spesifik antigen yang mensekresi sel interferon-gamma (IFN-). Kemudian, produksi sitokin intraseluler dideteksi dalam sel Vero menggunakan analisis flow cytometric. Juga, uji imunosorben terkait-enzim (ELISA) dan uji mikronetralisasi pengurangan plak (PRMNT) dilakukan untuk setiap sampel.

Hasil

Fakta Terkait

– Studi mengeksplorasi prevalensi dan lintasan gejala COVID panjang

– Beberapa peristiwa rekombinasi antar-varian diidentifikasi dalam subvarian Omicron

– Studi menemukan mRNA chimeric menginduksi antibodi penetralisir yang kuat dan bertindak luas terhadap varian SARS-CoV-2

Hasil penelitian menunjukkan bahwa total empat alel non-referensi terdeteksi pada rSARS-CoV-2 dengan defisiensi ORF ganda. Dari empat alel non-referensi, dua dengan frekuensi 58,52% dan 57,69% ditemukan pada rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF6, sedangkan satu memiliki frekuensi 12,04% pada rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a dan satu lagi memiliki frekuensi rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a. 14,94% dalam rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7b.

Tiga rSARS-CoV-2 dengan defisiensi ORF ganda memiliki diameter plak yang lebih kecil daripada rSARS-CoV-2 WT dan juga titer puncak yang lebih rendah untuk hACE2 dibandingkan dengan rSARS-CoV-2 WT. Selanjutnya, titer yang lebih rendah pada sampel hidung dan paru-paru tikus yang terinfeksi diamati pada rSARS-CoV-2 yang kekurangan ORF ganda dibandingkan dengan rSARS-CoV-2 WT.

Analisis respons imun di paru-paru tikus yang terinfeksi hACE2 dan diobati dengan rSARS-CoV-2 yang kekurangan ORF ganda pada 2 titik per inci linier (dpi) tidak menunjukkan perbedaan yang mencolok kecuali bahwa yang terinfeksi rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a tikus telah menurunkan tanggapan IFN. Namun, pada 4 dpi, level IFN- yang lebih rendah diamati pada tikus yang terinfeksi rSARS-CoV-2 yang kekurangan ORF daripada rSARS-CoV-2 WT, sementara tidak ada pengurangan seperti itu yang ditemukan pada level IFN-.

Semua tikus transgenik yang terinfeksi hACE2 dan rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a dan dua dari lima tikus yang terinfeksi rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF6 meninggal pada infeksi 9 dpi sementara tiga dari yang terakhir pulih dan selamat dari infeksi. Juga, sementara semua tikus yang terinfeksi rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a dan rSARS-CoV-2 WT menyerah pada infeksi virus, durasi kelangsungan hidup tikus yang terinfeksi dengan yang pertama lebih tinggi daripada yang terakhir.

Secara keseluruhan, tim mengamati tingkat kelangsungan hidup 60% untuk tikus yang diobati dengan rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF6 dan 100% untuk tikus yang diobati dengan rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7b.

Studi ini juga menyelidiki keamanan dan kemanjuran rSARS-CoV-2 dengan defisiensi ORF ganda pada hamster. Penurunan 15% pada berat badan hamster yang terinfeksi rSARS-CoV-2 WT pada 6 dpi diamati sementara tidak ada perubahan berat badan pada hamster yang terinfeksi rSARS-CoV-2 dengan defisiensi ORF ganda.

Juga, tidak ada beban virus menular yang ditemukan pada hamster yang terinfeksi rSARS-CoV-2 dengan defisiensi ORF ganda. Selain itu, potensi penetralan yang tinggi diamati pada hamster ganda yang terinfeksi rSARS-CoV-2 yang kekurangan ORF terhadap strain SARS-CoV-2 WA1 dan VOC alfa, beta, delta, dan Omikron sementara tidak ada infektivitas virus yang terdeteksi di jaringan tubuh.

Baca juga tentang covid-19 di costellocostello.com

Kesimpulan

Temuan penelitian menunjukkan bahwa tiga rSARS-CoV-2 yang kekurangan ORF ganda dapat secara efisien mengekspresikan protein struktural virus tanpa adanya protein aksesori yang berbeda. RSARS-CoV-2 yang kekurangan ORF ganda ini dapat menginduksi respons imun yang kuat dan adaptif setelah pemberian intranasal tunggal yang memberikan perlindungan yang cukup terhadap infeksi dan keparahan SARS-CoV-2. Para peneliti percaya bahwa penelitian ini menjadikan rSARS-CoV-2 dengan defisiensi ORF ganda sebagai kandidat LAV profilaksis yang ideal terhadap COVID-19.